顯微鏡種類
好的顯微鏡應具有三個特性：
- 良好的分辨率：分辨率能力是指產生緊密放置的對象的單獨圖像的能力，以便可以將它們區分為兩個單獨的實體。分辨率：
- 良好的對比度：可以通過對樣本進行染色來進一步改善。
- 良好的放大倍率：這是通過使用凹透鏡實現的。
明場或光學顯微鏡
明場或光顯微鏡在較亮的背景下形成深色圖像。
暗視野顯微鏡
原理：在暗視野顯微鏡中，物體在黑暗背景下顯得明亮。這可以通過使用特殊的暗場聚光鏡來實現。
應用范圍：用于鑒定活的，未染色的細胞和螺旋菌等薄細菌，這些細菌無法通過光學顯微鏡觀察。
相襯顯微鏡
它通過在細胞與水之間形成對比度差異來可視化活細胞。它將折射率和細胞密度的細微差異轉換為易于檢測的光強變化。
對于研究以下內容很有用：
- 微生物運動
- 確定活細胞的形狀
- 檢測細菌成分，如內生孢子和包涵體。
熒光顯微鏡
原理：當熒光染料暴露于紫外線（UV）時，它們會被激發并發出熒光，即它們將這種不可見的短波長射線轉換為更長波長的光（可見光）。
應用：落射熒光顯微鏡具有以下應用：
- 當置于紫外線燈下時，例如環孢菌素，自發熒光
- 涂有熒光染料的微生物，例如用于瘧疾寄生蟲（QBC）的A啶橙和用于結核分枝桿菌的金胺酚。
- 免疫熒光：它使用熒光染料標記的抗體來檢測細胞表面抗原或與細胞表面抗原結合的抗體。共有三種類型：直接IF，間接IF和流式細胞儀。
電子顯微鏡
它是由恩斯特·魯斯卡（Ernst Ruska）于1931年**的。它與光學顯微鏡的不同之處不同。
EM有兩種類型：
- 透射EM（MC型，檢查內部結構，分辨率0.5 nm，給出二維視圖）
- 掃描EM（檢查表面，分辨率為7 nm，提供3維視圖）
透射電子顯微鏡的原理
樣品制備：對細胞進行以下步驟以制備非常薄的樣品（20至100 nm厚）
- 固定：使用戊二醛或四氧化固定細胞，以使其穩定。
- 脫水：然后將樣品用有機溶劑（例如丙酮或乙醇）脫水。
- 包埋：將標本包埋在塑料聚合物中，然后硬化形成固體塊。大多數塑料聚合物是水不溶性的。因此，在包埋之前必須將樣品完全脫水。
- 切片：然后用超薄切片刀將標本切成薄片，并將切片安裝在金屬載玻片（銅）上。
冷凍蝕刻技術：這是一種用于標本制備的可視化細胞內部細胞器的替代方法。
將細胞迅速冷凍，然后加熱→用刀暴露內部細胞器使其破裂→升華→用鉑和碳涂層遮蓋。
提高EM對比度的措施包括：
- 通過重金屬鹽（如檸檬酸鉛和乙酸鈾酰）的溶液染色
- 用重金屬如磷鎢酸或乙酸鈾酰進行負染色。
- 陰影：標本以45°角涂有鉑或其他重金屬的薄膜，使金屬僅在一側撞擊微生物。
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