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顯微鏡的種類

微生物實(shí)驗(yàn)室可使用各種類型的顯微鏡顯微鏡具有多種用途和修改形式,有助于其實(shí)用性。

光學(xué)顯微鏡。實(shí)驗(yàn)室中使用的普通光學(xué)顯微鏡稱為復(fù)合顯微鏡,因?yàn)樗瑑煞N類型的可放大物體的透鏡。zui靠近眼睛的晶狀體稱為目鏡,而zui靠近物體的晶狀體稱為物鏡。大多數(shù)顯微鏡在其底座上都有一個(gè)稱為聚光鏡的設(shè)備,該設(shè)備將光線會(huì)聚為強(qiáng)光束。甲隔膜位于所述冷凝器控制光通過(guò)它的到來(lái)的量。在光學(xué)顯微鏡上可以找到粗調(diào)和精調(diào)(圖)。

為了放大物體,光線會(huì)通過(guò)舞臺(tái)上的一個(gè)開(kāi)口投射,然后撞擊物體然后進(jìn)入物鏡。創(chuàng)建一個(gè)圖像,該圖像成為用于放大該圖像的眼鏡的對(duì)象。因此,用顯微鏡可能得到的總放大倍數(shù)是物鏡實(shí)現(xiàn)的放大倍數(shù)乘以目鏡獲得的放大倍數(shù)。

復(fù)合光學(xué)顯微鏡通常包含四個(gè)物鏡:掃描透鏡(4X),低倍透鏡(10X),高倍透鏡(40 X)和油浸透鏡(100 X)。使用放大10倍的目鏡,掃描鏡頭的總放大倍數(shù)將為40 X,低倍鏡的放大倍數(shù)為100 X,高倍鏡的放大倍數(shù)為400 X,油浸鏡頭的放大倍數(shù)為1000X。大多數(shù)顯微鏡都是近焦的。這個(gè)術(shù)語(yǔ)意味著當(dāng)一個(gè)顯微鏡從一個(gè)物鏡切換到下一個(gè)物鏡時(shí),顯微鏡將保持聚焦。

在顯微鏡下清楚地看到兩個(gè)項(xiàng)目作為獨(dú)立對(duì)象的能力稱為顯微鏡的分辨率。分辨率部分取決于用于觀察的光的波長(zhǎng)。可見(jiàn)光的波長(zhǎng)約為550nm,而紫外光的波長(zhǎng)約為400nm或更小。顯微鏡的分辨率隨著波長(zhǎng)的減小而增加,因此紫外線使人們能夠檢測(cè)可見(jiàn)光看不到的物體。鏡頭的分辨力是指該鏡頭可以看到的zui小物體的尺寸。分辨力基于所用光的波長(zhǎng)和透鏡的數(shù)值孔徑。的數(shù)值孔徑(NA)指可以進(jìn)入透鏡的zui寬的光錐;NA刻在物鏡的側(cè)面。

如果用戶要清楚地看到物體,則必須有足夠的光進(jìn)入物鏡。對(duì)于現(xiàn)代顯微鏡,對(duì)于掃描,低倍和高倍鏡頭而言,進(jìn)入物鏡并不是問(wèn)題。但是,油浸鏡頭非常狹窄,大多數(shù)光線都無(wú)法射中。因此,該對(duì)象的觀看效果很差且沒(méi)有分辨率。為了提高油浸鏡頭的分辨率,在鏡頭和載玻片之間放了一滴浸油(圖)。浸入的油具有與載玻片相同的抗彎能力(折射率),因此當(dāng)浸入油穿過(guò)載玻片到達(dá)油并到達(dá)物鏡時(shí),它保持光線成一直線,即浸油鏡片。隨著進(jìn)入物鏡的光量的增加,物體的分辨率提高,人們可以觀察到像細(xì)菌一樣小的物體。分辨率在其他類型的顯微鏡中也很重要。

其他光學(xué)顯微鏡。除了熟悉的復(fù)合顯微鏡外,微生物學(xué)家還可以將其他類型的顯微鏡用于特定目的。這些顯微鏡可以觀察光學(xué)顯微鏡無(wú)法看到的物體。

另一種可選的顯微鏡是暗視野顯微鏡,用于觀察活的螺旋體,例如引起梅毒的螺旋體。該顯微鏡包含一個(gè)特殊的聚光器,該聚光器會(huì)散射光并使它以一定角度從樣本反射回來(lái)。在深色背景上可以看到一個(gè)輕的物體。

第二種替代顯微鏡是相襯顯微鏡。該顯微鏡還包含特殊的聚光器,它們會(huì)“異相”投射光,并使其以不同的速度穿過(guò)物體。用該顯微鏡可以清楚地看到未染色的活生物體,并且可以用該儀器看到內(nèi)部細(xì)胞部分,例如線粒體,溶酶體和高爾基體。

熒光顯微鏡利用紫外光作為其光源。當(dāng)紫外線照射到物體上時(shí),它會(huì)激發(fā)物體的電子,并且它們發(fā)出各種陰影的光。由于使用紫外線,因此物體的分辨率提高。一種稱為熒光抗體技術(shù)的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)使用熒光染料和抗體來(lái)幫助識(shí)別未知細(xì)菌。

電子顯微鏡。電子顯微鏡中使用的能源是電子束。由于光束的波長(zhǎng)非常短,因此光束會(huì)撞擊其路徑中的大多數(shù)物體,并顯著提高顯微鏡的分辨率。用此儀器可以看到病毒和一些大分子。電子在真空中傳播,以避免與偏轉(zhuǎn)的空氣分子接觸,磁鐵將光束聚焦在要觀察的物體上。在監(jiān)視器上創(chuàng)建圖像并由技術(shù)人員查看。

電子顯微鏡的更傳統(tǒng)形式是透射電子顯微鏡(TEM)。要使用此儀器,可將超薄的微生物或病毒切片放在線柵上,然后在觀察之前用金或鈀染色。樣品的密集涂層部分使電子束偏轉(zhuǎn),圖像上同時(shí)出現(xiàn)了暗區(qū)和亮區(qū)。

的掃描電子顯微鏡(SEM)是在更現(xiàn)代的形式電子顯微鏡。盡管此顯微鏡的放大率低于TEM,但SEM允許對(duì)微生物和其他物體進(jìn)行三維觀察。使用整個(gè)物體,并使用金或鈀染色。

光學(xué)顯微鏡。(a)普通光學(xué)顯微鏡的重要部分。(b)浸油如何收集更多的光以供顯微鏡使用。

為了放大物體,光線會(huì)通過(guò)舞臺(tái)上的一個(gè)開(kāi)口投射,然后撞擊物體然后進(jìn)入物鏡。創(chuàng)建一個(gè)圖像,該圖像成為用于放大該圖像的眼鏡的對(duì)象。因此, 用顯微鏡可能得到的  總放大倍數(shù)是物鏡實(shí)現(xiàn)的放大倍數(shù)乘以目鏡獲得的放大倍數(shù)。

復(fù)合光學(xué)顯微鏡通常包含四個(gè)  物鏡:  掃描透鏡(4X),低倍透鏡(10X),高倍透鏡(40 X)和油浸透鏡(100 X)。使用放大10倍的目鏡,掃描鏡頭的總放大倍數(shù)為40 X,低倍鏡的放大倍數(shù)為100 X,高倍鏡的放大倍數(shù)為400 X,油浸鏡頭的放大倍數(shù)為1000X。大多數(shù)顯微鏡都是近  焦的。這個(gè)術(shù)語(yǔ)意味著當(dāng)一個(gè)顯微鏡從一個(gè)物鏡切換到下一個(gè)物鏡時(shí),顯微鏡將保持聚焦。

在顯微鏡下清楚地看到兩個(gè)項(xiàng)目作為獨(dú)立對(duì)象的能力稱為顯微鏡的  分辨率  。分辨率部分取決于用于觀察的光的波長(zhǎng)。可見(jiàn)光的波長(zhǎng)約為550nm,而紫外光的波長(zhǎng)約為400nm或更小。顯微鏡的分辨率隨著波長(zhǎng)的減小而增加,因此紫外線使人們能夠檢測(cè)可見(jiàn)光看不到的物體。 鏡頭的  分辨力是指該鏡頭可以看到的zui小物體的尺寸。分辨力基于所用光的波長(zhǎng)和透鏡的數(shù)值孔徑。的數(shù)值孔徑(NA) 指可以進(jìn)入透鏡的zui寬的光錐;NA刻在物鏡的側(cè)面。

如果用戶要清楚地看到物體,則必須有足夠的光進(jìn)入物鏡。對(duì)于現(xiàn)代顯微鏡,對(duì)于掃描鏡,低倍鏡和高倍鏡而言,進(jìn)入物鏡并不是問(wèn)題。但是,油浸鏡頭非常狹窄,大多數(shù)光線都無(wú)法射中。因此,該對(duì)象的觀看效果很差且沒(méi)有分辨率。為了提高油浸鏡頭的分辨率,在 鏡頭和載玻片之間放置一滴  浸油(圖  1)。 )。浸入的油具有與載玻片相同的抗彎能力(折射率),因此當(dāng)浸入油穿過(guò)載玻片到達(dá)油并到達(dá)物鏡時(shí),油會(huì)保持在一條直線上,即浸油鏡片。隨著進(jìn)入物鏡的光量的增加,物體的分辨率提高,人們可以觀察到像細(xì)菌一樣小的物體。分辨率在其他類型的顯微鏡中也很重要。

其他光學(xué)顯微鏡。 除了熟悉的復(fù)合顯微鏡外,微生物學(xué)家還可以將其他類型的顯微鏡用于特定目的。這些顯微鏡可以觀察光學(xué)顯微鏡無(wú)法看到的物體。

另一種顯微鏡是  暗視野顯微鏡,用于觀察活的螺旋體,例如引起梅毒的螺旋體。該顯微鏡包含一個(gè)特殊的聚光器,該聚光器會(huì)散射光并使它以一定角度從樣本反射回來(lái)。在深色背景上可以看到一個(gè)輕的物體。

第二種替代顯微鏡是  相襯顯微鏡。 該顯微鏡還包含特殊的聚光器,它們會(huì)“異相”投射光,并使其以不同的速度穿過(guò)物體。用該顯微鏡可以清楚地看到未染色的活生物體,并且可以用該儀器看到內(nèi)部細(xì)胞部分,例如線粒體,溶酶體和高爾基體。

該  熒光顯微鏡  利用紫外光作為其光源。當(dāng)紫外線照射到物體上時(shí),它會(huì)激發(fā)物體的電子,并且它們發(fā)出各種陰影的光。由于使用紫外線,因此物體的分辨率提高。一種稱為熒光抗體技術(shù)的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)采用熒光染料和抗體來(lái)幫助識(shí)別未知細(xì)菌。

電子顯微鏡。電子顯微鏡中  使用的能源是  電子  束。由于光束的波長(zhǎng)非常短,因此光束會(huì)撞擊其路徑中的大多數(shù)物體,并顯著提高顯微鏡的分辨率。用此儀器可以看到病毒和一些大分子。電子在真空中傳播,以避免與偏轉(zhuǎn)的空氣分子接觸,磁鐵將光束聚焦在要觀察的物體上。在監(jiān)視器上創(chuàng)建圖像并由技術(shù)人員查看。

電子顯微鏡的更傳統(tǒng)形式是  透射電子顯微鏡(TEM)。 要使用此儀器,可將超薄的微生物或病毒切片放在線柵上,然后在觀察之前用金或鈀染色。樣品的密集涂層部分使電子束偏轉(zhuǎn),圖像上同時(shí)出現(xiàn)了暗區(qū)和亮區(qū)。

的  掃描電子顯微鏡(SEM)  是在更現(xiàn)代的形式電子顯微鏡。盡管該顯微鏡的放大率低于TEM,但SEM允許對(duì)微生物和其他物體進(jìn)行三維觀察。使用整個(gè)物體,并使用金或鈀染色。

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