制備樣品以進(jìn)行TEM可視化

透射電鏡下要觀察的標(biāo)本必須經(jīng)過特殊的制備技術(shù)，以實(shí)現(xiàn)可視化和創(chuàng)建清晰的圖像。

• 電子很容易被吸收，并且容易散布在固體元素上，顯示出較厚的樣品的可視性差。因此，非常薄的樣本也可用于精確清晰的可視化，從而形成清晰的圖像。標(biāo)本應(yīng)薄約20-100nm，直徑應(yīng)為0.025-0.1nm，與細(xì)菌細(xì)胞一樣小。薄樣品允許在真空空間中與電子相互作用，能夠保持其固有結(jié)構(gòu)。
• 為了獲得薄片樣品，shou先將樣品與戊二醛或四氧化固定在塑料材料上。這些化學(xué)試劑穩(wěn)定細(xì)胞的結(jié)構(gòu)并保持其原創(chuàng)性。加入有機(jī)溶劑（如酒精）如乙醇會完全使細(xì)胞脫水，從而將標(biāo)本嵌入塑料中。
• 然后通過加入未聚合的液態(tài)環(huán)氧塑料滲透樣品，使其硬化成固體塊狀。在這里，可以使用玻璃刀和一臺稱為超薄切片機(jī)的特殊設(shè)備從薄板上切下薄片。
• 然后對樣本進(jìn)行適當(dāng)?shù)娜旧ㄟm當(dāng)?shù)娜旧允闺娮泳鶆蛏⑸?。然后將薄片浸入重金屬元素（如檸檬酸鉛和乙酸鈾酰）中，使貧金屬離子和鋁離子結(jié)合到細(xì)胞結(jié)構(gòu)上。這對電池結(jié)構(gòu)上的電子形成不透明層，以增加對比度。
• 然后將染色的薄片安裝在銅柵上以進(jìn)行查看。
• TEM下用于觀察的主要染色技術(shù)是負(fù)染色和重金屬元素涂層。金屬涂層會散射電子，而電子會出現(xiàn)在照相膠片上，而未涂層的部分則用于研究細(xì)菌，病毒細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。

防凍處理：

為了減少偽影的可能危險，與化學(xué)固定，脫水和包埋不同，大多數(shù)樣品都被污染了，冷凍癢特別用于微生物細(xì)胞的處理。

• 對微生物細(xì)胞器進(jìn)行特殊處理，稱為“冷凍-癢”，用液氮制備標(biāo)本，然后在真空室中將其加熱到-100°C。
• 然后用-196℃的液氮中的預(yù)冷刀切下這些切片。在高真空下將切片的樣品加熱約2分鐘后，可以將其涂覆在鉑和碳層上，形成復(fù)制品。
• 然后在TEM下查看這些圖像，以3D形式顯示單元的更詳細(xì)的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。
• 用液氮處理的這一步驟稱為凍癢。